有小胶质细胞特异性的AAV吗? 嗯!

  • 日期:08-23
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脑科学新闻2011.3.70我想分享image.php?url=0MmIN6QnFM

姬老师

小凯,从PD患者的小胶质细胞中选出的最后几个基因,你想怎么做?

小凯学生

姬老师,我读了一篇关于小胶质细胞中A20功能的文章。这篇文章的想法非常经典。从表型到机制的设计非常清楚。我也打算这样做

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步骤1转基因小鼠的构建

首先,在Cx3Cr1后插入Cre重组酶序列以获得Cx3Cr1Ert2-Cre转基因小鼠。由于Cx3Cr1在脑中的小胶质细胞中特异性表达,因此小鼠小胶质细胞特异性表达Cre重组酶。然后在A20的外显子4和5的两侧插入两个同源loxp位点,然后使两只小鼠杂交。两代后,可以获得脑中小胶质细胞特异性敲除A20转基因。老鼠。

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图1.小胶质细胞特异性敲除A20小鼠的构建

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姬老师

这.好吧,我们先谈谈吧。

Step2表型分析

小胶质细胞,一种单核巨噬细胞,定植于中枢神经系统。在休息时,小胶质细胞具有较小的细胞体和较少的分支。当受到刺激时,小胶质细胞激活并且数量增加,细胞体变大。增加突起。经过染色和小胶质细胞计数和形态学分析,发现敲除A20后小鼠脑和脊髓中小胶质细胞数和细胞分支和末端数明显增加。

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图2. A20表型的小胶质细胞特异性敲低

敲除小鼠脑中过度激活小胶质细胞会影响兴奋性突触功能,从而导致认知功能受损。

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图3.A20小鼠中认知功能表型的小胶质细胞特异性敲除

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姬老师

那么,表型就是这样做的。

Step3机制研究

敲除A20的小鼠在脑中注射半致死剂量的LPS,结果显示A20对小胶质细胞中LPS诱导的炎症具有抗性。

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图4.小胶质细胞特异性敲除A20后的LPS刺激

炎症体是由多种蛋白质组成的复合物。 NOD样受体(NLRP3)炎性体是最彻底研究的炎性囊泡类型。他们参与了MS等各种疾病的发展。发展已成为相关疾病治疗药物开发的热点。作者进一步研究了具有小胶质细胞特异性敲低A20的小鼠由于IL-1β分泌而加重了MS样疾病,并且由过度活化的Nlrp3炎性体引起的中枢神经系统炎症增加。

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图6.IL1-β分泌和Nlrp3炎性体激活

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姬老师

小凯学生

所以,姬老师,我现在准备建立一个基因载体!

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姬老师

这个想法是正确的,但该方法仍在考虑之中。时间宝贵,金钱珍贵。如果你看下面的内容,建立一个直接注射AAV的转基因小鼠是方便和方便的!

AAV

cKO小鼠

运作流程

简单

复杂的

耗费时间

下游实验可在2-6周内开始

至少需要一年时间

请求

可控

表达效率是可控的

表达效率不明确

成本

小凯学生

敲除鼠标是否具体?

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姬老师

平时不跟进新技术,去吉开官网看看吧!

GK基因最近引入了一种小胶质细胞特异性启动子AAV载体:

过去,AAV对小胶质细胞的感染经常遇到感染效率低,细胞特异性差等问题,限制了AAV在小胶质细胞功能研究中的应用。研究发现,当对AAV6血清型病毒蛋白衣壳进行修饰和修饰以制备Y731F/Y705F/T492V突变时,AAV显着提高了小胶质细胞的感染效率。

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图7.优化AAV6病毒衣壳后感染的显着增加

效率得到保证,那么如何确保特异性呢?该研究发现使用F4/80和CD68启动子的AAV可以在小胶质细胞中特异性表达。

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图8.小胶质细胞中F4/80,CD68启动子AAV特异性表达

根据上述研究,Jikai基因已开发出一种小胶质细胞特异性AAV载体,可有效感染和靶向并调节小胶质细胞。

此外,我们还推出了一系列流行的组织特异性AAV载体,如内皮细胞,肌肉细胞,肝细胞和视网膜Mulle细胞,可在2-6周内实现不同组织的特异性表达。参与文章的最后并获得免费试用。

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